皇冠足彩网址大全体育彩票店打票_单细胞转录组分析之DoubletFinder去除双细胞
发布日期:2026-09-18 01:05    点击次数:87
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欧博百家乐官网澳门银河娱乐城❞单细胞转录组,因为其本领原因,在好多期间,会形成双细胞的情况,一般我们进行基础的质控之后,好点的数据是莫得问题的。现在也有好多算法进行双细胞的瞻望,然则一定要注重,不管是哪种口头,齐是有风险的,可能或者去除双细胞,但也有可能形成你闲居细胞的删除,是以在使用的期间需要介怀。这也等于我们之前一直莫得进行这个分析的原因,因为这是一个可选的现实。现在基于R的去除双细胞的口头有DoubletFinder、DoubletDecon,python的有scrublet、DoubletDetection。议论到好多东说念主使用R以及文件中出现最多的,我们这里讲授DoubletFinder。用一句粗造的言语阐发它的旨趣等于:东说念主为模拟双细胞,然后用你的细胞与模拟双细胞对比,那么更鸠集的就有可能是双细胞。

DoubletFinder原文和github不错稽查学习更深切的旨趣:https://github.com/chris-mcginnis-ucsf/DoubletFinder。至于DoubletFinder的使用,在其官网上其实有详备的教程,也很浅近。然则需要注重的是,要是你现在使用,最佳更新成最新的版块,DoubletFinder也维持seurat V5,此外还需要注重,更新后的DoubletFinder有些函数的称呼更动了,是以要是你参考之前的一些网上的教程可能会有问题。DoubletFinder的使用需要注重,只可单个样本使用,不可用整合的data。

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那么这里我们的更动仅仅,我们让这个分析过程愈加浅近,包装了一个函数,快捷的进行分析,无谓一步步的写。完好现实已发布微信VIP!

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率先我们单个的构建seurat object,要跑完通盘这个词seurat进程才不错进行分析:

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setwd("D:\\KS名目\\公众号著作\\单细胞ATAC-signac分析教程")library(Seurat)dirs = list.files('./',pattern='[scRNA]$')seurat_object = lapply(dirs,function(dirs){ CreateSeuratObject(counts = Read10X(dirs),                      project = dirs,min.cells = 3, min.features = 200)})#qcfor (i in seq_along(seurat_object)) {  seurat_object[[i]][["percent.mt"]] <- PercentageFeatureSet(seurat_object[[i]], pattern = "^MT-")  seurat_object[[i]][["percent.rp"]] <- PercentageFeatureSet(seurat_object[[i]],pattern = "^RP[SL]")  seurat_object[[i]] <- subset(seurat_object[[i]],                           subset = nCount_RNA > 1000 &                             nFeature_RNA < 6000 &                             percent.mt < 20 & percent.rp < 40)}names(seurat_object) <- c("AA","HC","SD")for (i in seq_along(seurat_object)) {  seurat_object[[i]] <- NormalizeData(seurat_object[[i]]) %>% FindVariableFeatures(., nfeatures = 4000)%>%     ScaleData(., vars.to.regress = c("percent.mt", "percent.rp"), verbose = FALSE)}#run PCAfor (i in seq_along(seurat_object)) {  seurat_object[[i]] <- RunPCA(seurat_object[[i]], npcs = 50, verbose = FALSE)}# Seurat::ElbowPlot(seurat_object[[1]], ndims = 50)#clusterfor (i in seq_along(seurat_object)) {  seurat_object[[i]] <- RunUMAP(seurat_object[[i]], reduction = 'pca', dims = 1:20)%>%     FindNeighbors(., reduction = 'pca', dims = 1:20)%>%     FindClusters(., resolution = 0.4) }

上头等于浅近的seurat进程,这是按照seurat V4跑的。装配下最新的DoubletFinder包。望望函数的参数:我们将通盘这个词进程包装在了函数内部:

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#之前的卸载了,我们用最新的测试# remotes::install_github('chris-mcginnis-ucsf/DoubletFinder')# library(DoubletFinder)

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去除双细胞:
seurat_object[[1]] <- ks_detectDoublet(seurat_object[[1]],dims = 1:30,estDubRate=0.065,                                       ncores = 2, SCTransform=F, Homotypic=F, annotation="seurat_clusters")seurat_object[[2]] <- ks_detectDoublet(seurat_object[[2]],dims = 1:30,estDubRate=0.025,                                       ncores = 2, SCTransform=F, Homotypic=F, annotation="seurat_clusters")seurat_object[[3]] <- ks_detectDoublet(seurat_object[[3]],dims = 1:30,estDubRate=0.060,                                       ncores = 2, SCTransform=F, Homotypic=F, annotation="seurat_clusters")#plotduPlot <- list()for (i in seq_along(seurat_object)) {    p = DimPlot(seurat_object[[i]], group.by = "DF.classify")+ggtitle(unique(seurat_object[[i]]$orig.ident))    duPlot[[i]] <- p  }library(cowplot)plot_grid(duPlot[[1]],duPlot[[2]],duPlot[[3]], ncol = 3)###remove Doubletfor (i in seq_along(seurat_object)) {    seurat_object[[i]] <- subset(seurat_object[[i]], subset = (DF.classify == "Singlet"))  }

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终末我们再行团结样本,跑进程即可:
###reclusterscRNA_ha <- merge(seurat_object[[1]], y=c(seurat_object[[2]],seurat_object[[3]]),                  add.cell.ids =c("AA","HC","SD"))scRNA_ha <- NormalizeData(scRNA_ha, normalization.method = "LogNormalize") %>%   FindVariableFeatures(., selection.method = "vst", nfeatures = 3000)scRNA_ha <- ScaleData(scRNA_ha, vars.to.regress = c("percent.mt", "percent.rp"), verbose = T)scRNA_ha <- RunPCA(scRNA_ha, npcs = 50, verbose = FALSE)Seurat::ElbowPlot(scRNA_ha, ndims = 50)#去批次library(harmony)scRNA_ha <- RunHarmony(scRNA_ha, "orig.ident")scRNA_ha <- RunUMAP(scRNA_ha,  dims = 1:20, reduction = "harmony")scRNA_ha <- FindNeighbors(scRNA_ha, reduction = "harmony",dims = 1:20) scRNA_ha  <- FindClusters(object = scRNA_ha , resolution = seq(from = 0.1, to = 1.0,  by = 0.1))Idents(scRNA_ha) <- "RNA_snn_res.0.4"scRNA_ha$seurat_clusters <- [email protected](scRNA_ha,label = T)

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这等至今天的现实了,但愿对你有参考! 本站仅提供存储劳动,通盘现实均由用户发布,如发现存害或侵权现实,请点击举报。

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